慢病毒整合位點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)品強(qiáng)勢來襲

發(fā)布時間:2024/11/11分類:技術(shù)文章來源:科佰生物

嵌合抗原受體T細(xì)胞（Chimeric antigen receptor Tcell, CAR-T）免疫療法是將應(yīng)用基因修飾技術(shù)制備表達(dá)，嵌合抗原受體(Chimeric antigen receptor, CAR)的T淋巴細(xì)胞，經(jīng)體外擴(kuò)增后再回輸至患者體內(nèi)的一種個體化治療方法。

近年來，隨著Kymriah, Yescarta 以及 Strimvelis等細(xì)胞治療產(chǎn)品陸續(xù)推上市場，慢病毒作為細(xì)胞裝載CAR過程的關(guān)鍵中間載體，確保慢病毒為基礎(chǔ)的藥物質(zhì)量和安全性挑戰(zhàn)巨大。去年年底FDA公布調(diào)查CAR-T療法的安全性問題—T細(xì)胞癌癥風(fēng)險的出現(xiàn)被認(rèn)為源于其使用的基因遞送載體-慢病毒載體后，于今年1月31日正式發(fā)布“ Considerations for the development of Chimeric Antigen Receptor (CAR) T Cell Products”指導(dǎo)原則。當(dāng)中建議根據(jù)風(fēng)險評估來確定載體拷貝數(shù)（VCN）的放行標(biāo)準(zhǔn)。風(fēng)險評估包括插入位點(diǎn)分析、克隆優(yōu)勢、劑量、適應(yīng)癥、研究人群等研究支持的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。國家藥品監(jiān)督管理局藥品審批中心（CDE）發(fā)布的《基因修飾細(xì)胞治療產(chǎn)品非臨床研究與技術(shù)指導(dǎo)原則》也將“插入突變風(fēng)險評估”作為非臨床安全性研究的內(nèi)容，并詳細(xì)規(guī)定關(guān)鍵風(fēng)險因素的評估要點(diǎn)，因此CAR-T治療需要評估潛在的插入突變風(fēng)險和致癌性風(fēng)險。

慢病毒整合位點(diǎn)檢測方法

目前檢測慢病毒整合位點(diǎn)的主要平臺為高深度測序（NGS)。

Table 1. 常見慢病毒整合位點(diǎn)檢測方法比較

綜合考慮，科佰選擇多種方法（捕獲探針法測序+ sanger + ddPCR）驗(yàn)證，充分驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)品的準(zhǔn)確性。在驗(yàn)證過程中，捕獲探針法測序技術(shù)針對慢病毒整合位點(diǎn)檢測的準(zhǔn)確性得到了很好的驗(yàn)證。

慢病毒整合位點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)品

我國在2021年連續(xù)出臺了4部基因治療相關(guān)產(chǎn)品的指導(dǎo)原則都指出慢病毒整合檢測至少要包含1. 整合方向 2. 整合位置 3. 特定整合位置和整合方向的絕對克隆數(shù)目。

針對這一要求，科佰現(xiàn)推出慢病毒整合位點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)品。

部分產(chǎn)品數(shù)據(jù)展示：

Fig 1. Results of CBPL0002 by NGS (Probe capture method).

通過NGS（捕獲探針法測序）技術(shù)，結(jié)合生信分析方法，選取1000×以上Reads數(shù)的基因進(jìn)行Sanger以及ddPCR法驗(yàn)證，同時采用ddPCR方法檢測整合頻率。多種方法相結(jié)合，準(zhǔn)確定位慢病毒插入位點(diǎn)以及整合頻率。

Fig 2.Results of CBPL0002 by Sanger sequencing.

Fig 3.Results of CBPL0002 by ddPCR.

根據(jù)NGS（捕獲探針法測序）結(jié)果確定慢病毒插入位點(diǎn)，通過Sanger測序以及ddPCR法再次驗(yàn)證，準(zhǔn)確定位慢病毒插入位點(diǎn)以及整合頻率。

CAR-T細(xì)胞療法被認(rèn)為是最有前途的癌癥治療方法之一，其在血液系統(tǒng)瘤中的運(yùn)用已取得了優(yōu)異的療效，可靠的檢測方法可以準(zhǔn)確有效分析慢病毒插入位點(diǎn)，協(xié)助客戶評估插入突變的可能性以及相關(guān)的風(fēng)險，提高細(xì)胞免疫治療的安全性。

慢病毒整合位點(diǎn)檢測服務(wù)

科佰現(xiàn)推出針對慢病毒整合位點(diǎn)檢測服務(wù)（捕獲探針法測序技術(shù)）。捕獲探針法測序技術(shù)主要是針對LTR區(qū)域做探針捕獲，PCR后，NGS測序驗(yàn)證，結(jié)合生信分析方法，判斷慢病毒插入位點(diǎn)。后續(xù)同時采用了sanger以及ddPCR方法對NGS(捕獲探針法測序)技術(shù)進(jìn)行了驗(yàn)證，NGS(捕獲探針法測序)檢測出的位點(diǎn)，sanger以及ddPCR方法均檢出。