hCov-229E-N Pseudovirus Standard Reference
CBV30012
| I. 背景 | |
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HCoV-229E和HCoV-OC43都是在1960年代發(fā)現(xiàn)的，多年來一直被公認為引起普通感冒的原因，并在一生中引起頻繁的再感染。在成年人中，這些病毒每年占急性呼吸道疾病的 4％至15％，在高峰期高達35％。兒童的年發(fā)病率達到8％，最高發(fā)病率高達20％。據(jù)報道，成人中229E和OC43病毒的感染頻率為每年每100人15至25人不等，其中有80％的感染者是先前具有該感染病毒抗體的人。 根據(jù)CDC和WHO的介紹，針對HCoV-229E的核酸診斷一般是針對RdRP (RNA-dependent RNA polymerase)、Gene N和Gene E， Gene S更多用于對應藥物和疫苗的開發(fā)。NCBI收錄序列為 NC_002645.1，全長27317bp，基因編碼4個結構蛋白：S，M，N和E。 以往針對試劑盒檢測限的性能評價，一般是選擇體外轉錄的RNA、或者臨床陽性病毒來作為標準品，用于性能評價。但是兩者都具有很明顯的確定，首先體外轉錄的RNA，一般是很純，單一，不涉及提取，不符合臨床病毒的微環(huán)境，因此必然造成檢測靈敏度被高估，這也是存在高概率假陰性的主要原因；再次臨床陽性病毒，即使是滅活的病毒，也是存在很大的生物安全隱患，因此要求實驗室級別為P3-P4，大部分開發(fā)診斷試劑盒單位都不滿足改要求，另外臨床陽性病毒也是來源很有限，不能被穩(wěn)定供應，反復用于試劑盒的性能評價。 |
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| II.產(chǎn)品描述 | |
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有病毒的完整包膜結構，有HCoV-229E對應的核酸序列，但是生物安全風險較低的假病毒標準品，完美的克服了選擇體外轉錄的RNA、或者臨床陽性病毒來作為標準品的缺點，非常適合用于核酸診斷性能評價的標準品。 構建過程：HCoV-229E基因合成→假病毒包裝→純化→QC檢測（ddPCR） |
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| III. 產(chǎn)品介紹 | |
| 產(chǎn)品名稱: | hcov-229E-N Pseudovirus Standard Reference |
| 對應序列（詳情見附錄）: |
Gene N(1170bp) |
| 產(chǎn)品規(guī)格: | 1ml |
| 拷貝數(shù): | >1x10e7copies/ml |
| 生物安全級別: | P2 |
| 運輸與保存方式: | 干冰運輸，-90 ~ -70°C保存 |
| IV. 產(chǎn)品用途與優(yōu)勢 | |
| 產(chǎn)品用途: | HCoV-229E診斷試劑盒性能評價 |
| 產(chǎn)品優(yōu)勢: | • HCoV-229E的假病毒標準品，區(qū)別于以往體外合成的RNA、臨床陽性活病毒，完美克服兩者的缺點，真正適合用于試劑盒的性能評價，包含檢測限、特異性，重復性等；
• 根據(jù)HCoV-229E冠狀病毒的特點，選取了ORF1ab/RdRP（RNA-dependent RNA polymerase）、Gene E(envelope protein)、Gene N(nucleocapsid phosphoprotein)合計3個區(qū)段的序列，用于假病毒的包裝，3個區(qū)段很好的表征了HCoV-229E的特征序列； • 科佰生物設計了ddPCR體系的引物、探針序列，可不需要構建標準曲線的前提下完成對假病毒的QC拷貝數(shù)檢測，非常準確表征標準品的拷貝數(shù)，而且克服了Q-PCR分析CT值的相對判斷標準的不準確性； • 假病毒標準品，無致病性，可再生，質控方法可靠，批次間穩(wěn)定，可以長期穩(wěn)定制備和供應，而且要求實驗室生物安全級別為P2，滿足很多單位的安全需求。 |
| Ⅴ. 附錄 | |
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Gene N: atggc tacagtcaaa tgggctgatg catctgaacc acaacgtggt cgtcagggta
25741 gaatacctta ttctctttat agccctttgc ttgttgatag tgaacaacct tggaaggtga
25801 tacctcgtaa tttggtaccc atcaacaaga aagacaaaaa taagcttata ggctattgga
25861 atgttcaaaa acgtttcaga actagaaagg gcaaacgggt ggatttgtca cccaagctgc
25921 atttttatta tcttggcaca ggaccccata aagatgcaaa atttagagag cgtgttgaag
25981 gtgtcgtctg ggttgctgtt gatggtgcta aaactgaacc tacaggttac ggtgttaggc
26041 gcaagaattc agaaccagag ataccacact tcaatcaaaa gctcccaaat ggtgttactg
26101 ttgttgaaga acctgactcc cgtgctcctt cccggtctca gtcgaggtcg cagagtcgcg
26161 gtcgtggtga atccaaacct caatctcgga atccttcaag tgacagaaac cataacagtc
26221 aggatgacat catgaaggca gttgctgcgg ctcttaaatc tttaggtttt gacaagcctc
26281 aggaaaaaga taaaaagtca gcgaaaacgg gtactcctaa gccttctcgt aatcagagtc
26341 ctgcttcttc tcaaacttct gccaagagtc ttgctcgttc tcagagttct gaaacaaaag
26401 aacaaaagca tgaaatgcaa aagccacggt ggaaaagaca gcctaatgat gatgtgacat
26461 ctaatgtcac acaatgtttt ggccccagag accttgacca caactttgga agtgcaggtg
26521 ttgtggccaa tggtgttaaa gctaaaggct atccacaatt tgctgagctt gtgccgtcaa
26581 cagctgctat gctgtttgat agtcacattg tttccaaaga gtcaggcaac actgtggtct
26641 tgactttcac tactagagtg actgtgccca aagaccatcc acacttgggt aagtttcttg
26701 aggagttaaa tgcattcact agagaaatgc aacaacatcc tcttcttaac cctagtgcac
26761 tagaattcaa cccatctcaa acttcacctg caactgctga accagtgcgt gatgaagttt
26821 ctattgaaac tgacataatt gatgaagtaa actaa
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